作业帮如何增加PCR产物?我得PCR扩增循环数是30个,扩增体系是15微升,其中NTP的浓度是1.5,引物和酶都是1,模板是1.2,镁离子的浓度是1.0.能扩出目的条带,但是琼脂糖电泳条带不是很亮,即目的条带的量不
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/06 10:46:35
如何增加PCR产物?我得PCR扩增循环数是30个,扩增体系是15微升,其中NTP的浓度是1.5,引物和酶都是1,模板是1.2,镁离子的浓度是1.0.能扩出目的条带,但是琼脂糖电泳条带不是很亮,即目的条带的量不
如何增加PCR产物?
我得PCR扩增循环数是30个,扩增体系是15微升,其中NTP的浓度是1.5,引物和酶都是1,模板是1.2,镁离子的浓度是1.0.能扩出目的条带,但是琼脂糖电泳条带不是很亮,即目的条带的量不够,不能用于测序.后来也考虑减少循环数到25个,但是反而效果更不好,连目的条带都没有.也增加到35个循环,还是不理想.
如何增加PCR产物?我得PCR扩增循环数是30个,扩增体系是15微升,其中NTP的浓度是1.5,引物和酶都是1,模板是1.2,镁离子的浓度是1.0.能扩出目的条带,但是琼脂糖电泳条带不是很亮,即目的条带的量不
用的是哪个公司的试剂盒?taq酶有没有问题?自带的buffer里面有Mg2+吗?
有可能引物特异性不高PCR产物较少
也有可能产物有,但目标基因分子量较小,导致电泳效果不好
不能测序是对方公司说的?琼脂糖电泳都能跑出来了应该够量了吧
实在不行多做几管,收集在一起用PCR产物回收试剂盒浓缩
你模板量是多少？
1.2微升？
你模板浓度是多少？
大概折合后是多少纳克？
按你说的这种情况
很可能原因是由于模板量较少引起的
DNA稀释的时候不要稀释太多
加的时候体积不要变，提高浓度就可以了
最后跑胶的时候点样可多点一点...
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你模板量是多少？
1.2微升？
你模板浓度是多少？
大概折合后是多少纳克？
按你说的这种情况
很可能原因是由于模板量较少引起的
DNA稀释的时候不要稀释太多
加的时候体积不要变，提高浓度就可以了
最后跑胶的时候点样可多点一点
收起
有可能你的模板质量不高，加大模板的量。产物量不高不能降低循环数，只能增加，还有你用的是什么公司的酶啊？我们一般20UL体系，酶的量不超过0.5 ul,酶多了，也会有抑制作用的！