作业帮荧光定量PCR的引物如何设计..新手想问一下...做几个基因的定量.然后这几个基因的序列似乎没有,只在相近物种中的序列已经测过了....需要先做什么测序么
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/09 11:03:15
荧光定量PCR的引物如何设计..新手想问一下...做几个基因的定量.然后这几个基因的序列似乎没有,只在相近物种中的序列已经测过了....需要先做什么测序么
荧光定量PCR的引物如何设计..
新手想问一下...做几个基因的定量.然后这几个基因的序列似乎没有,只在相近物种中的序列已经测过了..
..需要先做什么测序么
荧光定量PCR的引物如何设计..新手想问一下...做几个基因的定量.然后这几个基因的序列似乎没有,只在相近物种中的序列已经测过了....需要先做什么测序么
如果你测定的基因序列未知,可以用同源基因或者别的物种的同类基因序列来设计引物,进行PCR,看看是否能够扩增出产物,并对产物进行确认,判断扩增的特异性.
如果确认无误,就可以进行荧光定量PCR.
首先根据其他物种中的序列设计兼并引物，在你做的物种中先把这几个基因的保守片段扩增出来，然后设计RACE引物，将全长cDNA序列扩增出来，经测序比对后最终确认。
然后，根据这几个基因的序列同源性比对结果，在同源性最低的区域设计各自的荧光定量PCR引物，扩增片段大小最好控制在80-150之间。...
全部展开
首先根据其他物种中的序列设计兼并引物，在你做的物种中先把这几个基因的保守片段扩增出来，然后设计RACE引物，将全长cDNA序列扩增出来，经测序比对后最终确认。
然后，根据这几个基因的序列同源性比对结果，在同源性最低的区域设计各自的荧光定量PCR引物，扩增片段大小最好控制在80-150之间。
收起
最理想的是有特异引物，实在没有就根据同源基因保守片段设计兼并引物，
但是定量PCR都是作为一种检测方法看待的，如果你建立的检测方法连起码的特异性都不具备，结果怎么能有说服力！嗯。我是想设计特异性引物。但是不知道序列。所以问一下是不是要用什么办法把全长弄出来去测序。。。...
全部展开
最理想的是有特异引物，实在没有就根据同源基因保守片段设计兼并引物，
但是定量PCR都是作为一种检测方法看待的，如果你建立的检测方法连起码的特异性都不具备，结果怎么能有说服力！
收起