简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/14 07:37:59
简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理

简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理
简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理

简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理
T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A,这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端.基于这个原理,常规的线性T-克隆载体(PUC18和PUC19等)在其3’末端添加一个T,这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆,并不需要添加任何特异性的粘性末端位点.这个就是T克隆的原理了.

做TA克隆吗?确定你PCR的时候用的扩增酶会在末尾pMD19-T和pGEM-T Easy没有原理上的差别,当然考虑到可能是载体放久了出invitrogen有一种做TA克隆

PCR产物末端都有A尾巴,与T-A克隆载体上的T互补连接到载体上

简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理 TA克隆时,如何选择T载体?在三博克隆测序,PCR产物长度只有85bp,选择什么样的T载体比较好呢? 我们机构想使用博凌科为的pSURE-T 载体连接试剂盒,据说可以简化PCR产物的克隆,用过的给我介绍下 PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么:经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 如何确保pcr产物以正确的方向克隆到表达载体中 (未翻译方向) 我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 T载体克隆为什么要用cDNA 约1800长度的片段,pcr扩增后显示长度合适,进行t-blunt载体克隆,转化感受态细胞,长出菌很少,甚至没有 DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量 PCR产物克隆用pMD19连不上,可以用pGEM-T Easy吗 T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体? 我想克隆一个基因.先进行PCR,PCR产物纯化回收,然后连接,转化,一直不成功.回收的片段很亮.我用的是Ex TAQ,他的加A尾效率应该很高了,做T-A克隆应该没有问题,但就是不成功.我还做了平行试验,con 简述克隆载体及基本元件 请问,把PCR产物拿去生物公司测序的问题是不是也是先要将PCR产物DNA连到载体上,再用载体的通用引物测序?应该不是吧……这个应该属于克隆测序吧?PCR产物直接测序是否就是直接用你给他的引 为什么构建克隆载体不需T4连接酶为什么PCR扩增出的DNA片段和克隆载体pMD 18-T连接不需T4连接酶,而和表达载体连接就需要T4连接酶. 克隆载体的定义是什么? 酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶 用pmd-18t载体克隆基因,能用M13测序吗要克隆基因,用的是TAKARA的PMD-18T载体,可以用M13测序吗?克隆基因最后这几步具体怎么做,