作业帮2008海南生物的一道题26．（18分）（选修模块3：现代生物科技专题）图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点,ampR为青霉素抗性基因,tctR为四环素抗
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/28 18:36:55
2008海南生物的一道题26．（18分）（选修模块3：现代生物科技专题）图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点,ampR为青霉素抗性基因,tctR为四环素抗
2008海南生物的一道题
26．（18分）（选修模块3：现代生物科技专题）图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点,ampR为青霉素抗性基因,tctR为四环素抗性基因,P为启动子,T为终止子,ori为复制原点.已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶且位点.
据图回答：
（1）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切,酶切产物用DNA连接酶进行连接后,其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有__ 、__、__
三种 .若要从这些连接产物中分离出重组质粒,需要对这些连接产物进行___.
（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验.之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 __；
（3）在上述实验中,为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切时应选用的酶是 __.
（4）目的基因表达时,RNA聚合酶识别和表达的位点是___.
这道题感觉没头绪,那位能给详细讲解一下（1）图上的基因切割,连接的过程是怎样的,（2）“用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验“是什么意思,为什么含有载体-载体的宿主细胞能生长在有四环素的培养基上而另外2种不行.（3）"目的基因表达时"是什么意思?
2008海南生物的一道题26．（18分）（选修模块3：现代生物科技专题）图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点,ampR为青霉素抗性基因,tctR为四环素抗
往简单讲,切割就是看着酶的名字,找到对应点,然后把圈圈拉开来,连接就是在对应位置把它再装回去
1.目的基因-载体连接物 载体-载体连接物 目的基因-目的基因连接物
筛选
这个很简单,理解起来应该没问题
2.“用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验”就是目的基因载入宿主细胞,并表达的过程
目的基因-目的基因连接物,本身连四环素抗性基因都没有,更别说表达了,死掉
目的基因-载体连接物,因为酶切位点破坏了四环素抗性基因,所以得不到表达,也死掉
载体-载体连接物,四环素抗性基因先被破坏,有连上了,能表达,所以活着
3.
用两种酶切,即双酶切法
4.目的基因表达就是切好连好了之后把重组质粒放到宿主细胞里,然后转录翻译的过程
在P点（题目里说了P是启动子）